Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

220 (ALK), 80 (NPM-ALK)

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9UM73

Entrez-Gene Id:

238

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:100

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of ALK only when phosphorylated at Tyr1078, which is equivalent to Tyr138 of NPM-ALK. This antibody may cross-react weakly with other overexpressed phospho-tyrosine kinases such as EGFR and Src.

Species Reactivity:

Human

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Mouse, Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Tyr1078 of human ALK protein.

Background

Anaplastic lymphoma kinase (ALK) is a tyrosine kinase receptor for pleiotrophin (PTN), a growth factor involved in embryonic brain development (1-3). In ALK-expressing cells, PTN induces phosphorylation of both ALK and the downstream effectors IRS-1, Shc, PLCγ, and PI3 kinase (1). ALK was originally discovered as a nucleophosmin (NPM)-ALK fusion protein produced by a translocation (4). Investigators have found that the NPM-ALK fusion protein is a constitutively active, oncogenic tyrosine kinase associated with anaplastic lymphoma (4). Research literature suggests that activation of PLCγ by NPM-ALK may be a crucial step for its mitogenic activity and involved in the pathogenesis of anaplastic lymphomas (5).
A distinct ALK oncogenic fusion protein involving ALK and echinoderm microtubule-associated protein like 4 (EML4) has been described in the research literature from a non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line, with corresponding fusion transcripts present in some cases of lung adenocarcinoma. The short, amino-terminal region of the microtubule-associated protein EML4 is fused to the kinase domain of ALK (6-8).
Phosphorylation of ALK at Tyr1078 was identified at Cell Signaling Technology (CST) using PhosphoScan®, CST's LC-MS/MS platform for phosphorylation site discovery. Phosphorylation of ALK at Tyr1078 was observed in select carcinoma cell lines and in tumors.

  1. Stoica, G.E. et al. (2001) J Biol Chem 276, 16772-9.
  2. Iwahara, T. et al. (1997) Oncogene 14, 439-49.
  3. Morris, S.W. et al. (1997) Oncogene 14, 2175-88.
  4. Morris, S.W. et al. (1994) Science 263, 1281-4.
  5. Bai, R.Y. et al. (1998) Mol Cell Biol 18, 6951-61.
  6. Rikova, K. et al. (2007) Cell 131, 1190-203.
  7. Takeuchi, K. et al. (2008) Clin Cancer Res 14, 6618-24.
  8. Soda, M. et al. (2007) Nature 448, 561-6.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 1
#12127

Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from KARPAS-299 cells, untreated (-) or treated with calf intestinal phosphatase (CIP; +), using Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb (upper) or ALK (C26G7) Rabbit mAb #3333 (lower). Cell Line Source: Dr Abraham Karpas at the University of Cambridge.
Immunoprecipitation Image 1: Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of phospho-NPM-ALK(Tyr138) from KARPAS-299 cell extracts, using Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (lane 2) or Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb (lane 3). Lane 1 is 10% input. Western blot analysis was performed using Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb. Cell Line Source: Dr Abraham Karpas at the University of Cambridge.