Revision 1
Cell Signaling Technology

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3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

62

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#P01106

Entrez-Gene Id:

4609

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of c-Myc protein only when phosphorylated at Thr58. This antibody may react to c-Myc when dually phosphorylated at Thr58 and Ser62. This phosphorylation site is also conserved at Thr58 in N-Myc.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Thr58 of human c-Myc protein.

Background

Members of the Myc/Max/Mad network function as transcriptional regulators with roles in various aspects of cell behavior, including proliferation, differentiation, and apoptosis (1). These proteins share a common basic-helix-loop-helix leucine zipper (bHLH-ZIP) motif required for dimerization and DNA-binding. Max was originally discovered based on its ability to associate with c-Myc and found to be required for the ability of Myc to bind DNA and activate transcription (2). Subsequently, Max has been viewed as a central component of the transcriptional network, forming homodimers as well as heterodimers with other members of the Myc and Mad families (1). The association between Max and either Myc or Mad can have opposing effects on transcriptional regulation and cell behavior (1). The Mad family consists of four related proteins; Mad1, Mad2 (Mxi1), Mad3, and Mad4, and the more distantly related members of the bHLH-ZIP family, Mnt and Mga. Like Myc, the Mad proteins are tightly regulated with short half-lives. In general, Mad family members interfere with Myc-mediated processes, such as proliferation, transformation, and prevention of apoptosis by inhibiting transcription (3,4).

Phosphorylation of c-Myc at Thr58 and Ser62 can control proteasomal-dependent degradation of the transcription factor. Phosphorylation of c-Myc at these sites is a stepwise process, whereby mitogens, mitosis, or cellular stress induce phosphorylation at Ser62, which serves as a priming site for GSK-3 phosphorylation of Thr58 (5-9).

  1. Baudino, T.A. and Cleveland, J.L. (2001) Mol Cell Biol 21, 691-702.
  2. Blackwood, E.M. and Eisenman, R.N. (1991) Science 251, 1211-7.
  3. Henriksson, M. and Lüscher, B. (1996) Adv Cancer Res 68, 109-82.
  4. Grandori, C. et al. (2000) Annu Rev Cell Dev Biol 16, 653-99.
  5. Lutterbach, B. and Hann, S.R. (1994) Mol Cell Biol 14, 5510-22.
  6. Gregory, M.A. et al. (2003) J Biol Chem 278, 51606-12.
  7. Yada, M. et al. (2004) EMBO J 23, 2116-25.
  8. Seo, H.R. et al. (2008) J Biol Chem 283, 15601-10.
  9. Benassi, B. et al. (2006) Mol Cell 21, 509-19.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

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Revision 1
#46650

Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from Daudi, EL4, and Raji cells, untreated (-) or treated with MG-132 #2194 (10 μM, 18hr; +), using Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb (upper), c-Myc (E5Q6W) Rabbit mAb #18583 (middle), or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower). Note that Raji cells have a point mutation at Thr58.
Western Blotting Image 2: Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from HDLM-2 cells, untreated (-) or treated with MG-132 #2194 (10 μM, 18 hr; +) or GSK-3 Inhibitor XXII, Compound A (5 μM, 18hr; +), using Phospho-c-Myc (Thr58) (E4Z2K) Rabbit mAb (upper), c-Myc (E5Q6W) Rabbit mAb #18583 (middle) or β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).