Revision 1

#45804Store at -20C

Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

81, 83

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#Q05469

Entrez-Gene Id:

3991

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-HSL (Ser660) Antibody detects endogenous levels of HSL only when phosphorylated at Ser660 by PKA. This antibody does not cross-react with Ser563, Ser565, or Ser659 phosphorylated HSL.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Human

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Ser650 of human HSL (equivalent to Ser660 of rat HSL). Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

HSL (hormone-sensitive lipase) catalyzes the hydrolysis of triacylglycerol, the rate-limiting step in lipolysis. Lipolytic stimuli activate adenylyl cyclase and thus increase intracellular cAMP levels, which in turn activate protein kinase A (PKA). PKA phosphorylates HSL at Ser563, Ser659, and Ser660, which stimulates HSL activity (1,2). In contrast, AMPK phosphorylates HSL at Ser565, which reduces HSL phosphorylation at Ser563 by PKA and inhibits HSL activity (2,3). Recent work indicates that phosphorylation at Ser600 by p44/42 MAPKs also enhances the enzymatic activity of HSL (4).

  1. Degerman, E. et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 533-37.
  2. Anthonsen, M.W. et al. (1998) J. Biol. Chem. 273, 215-21.
  3. Garton, A.J. and Yeaman, S.J. (1990) Eur. J. Biochem. 191, 245-50.
  4. Greenberg, A.S. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276, 45456-61.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#45804

Phospho-HSL (Ser660) Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-HSL (Ser660) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from 3T3-L1 cells, undifferentiated (lane 1) or differentiated 4 days into adipocytes and treated with isoproterenol (10 μM, 20 min; lane 2), using Phospho-HSL (Ser660) Antibody (upper) or α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487 (lower).
Western Blotting Image 2: Phospho-HSL (Ser660) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from 3T3-L1 cells, undifferentiated (lane 1) or differentiated 4 days into adipocytes and treated with isoproterenol (10 μM, 20 min; lane 2), using Phospho-HSL (Ser660) Antibody. Phospho-specificity was verified by incubating the antibody without peptide (left), with HSL (Ser660) non-phosphopeptide (middle), or with HSL (Ser660) phosphopeptide (right) prior to incubation with the membrane.