Revision 1
Cell Signaling Technology

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Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, IP

REACTIVITY:

H M

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

78, 74

Source/Isotype:

Rabbit IgG

UniProt ID:

#Q9BPZ7

Entrez-Gene Id:

79109

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Immunoprecipitation 1:50

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% glycerol and less than 0.02% sodium azide. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of Sin1 protein only when phosphorylated at Thr86.

Species Reactivity:

Human, Mouse

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Rat

Source / Purification

Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding phosphorylated Thr86 of human Sin1 protein.

Background

Cell growth is a fundamental biological process whereby cells accumulate mass and increase in size. The mammalian TOR (mTOR) pathway regulates growth by coordinating energy and nutrient signals with growth factor-derived signals (1). mTOR is a large protein kinase that is a component of two different complexes. The mTOR complex 1 (mTORC1), a target of rapamycin, contains mTOR, GβL, and raptor. mTORC2, insensitive to rapamycin, includes mTOR, GβL, Sin1, and rictor (1). The mTORC2 complex phosphorylates Ser473 of Akt/PKB in vitro (2). This phosphorylation is essential for full Akt/PKB activation. Furthermore, rictor siRNA knockdown inhibits Ser473 phosphorylation in 3T3-L1 adipocytes (3). mTORC2 has also been shown to phosphorylate the rapamycin-resistant mutants of S6K1, another effector of mTOR (4). In addition, phosphorylation of Sin1 at Thr86 by Akt/PKB was shown to regulate the activity of mTORC2 in adipocytes upon stimulation by growth factors (5).

  1. Sarbassov, D.D. et al. (2004) Curr Biol 14, 1296-302.
  2. Sarbassov, D.D. et al. (2005) Science 307, 1098-101.
  3. Hresko, R.C. and Mueckler, M. (2005) J Biol Chem 280, 40406-16.
  4. Ali, S.M. and Sabatini, D.M. (2005) J Biol Chem 280, 19445-8.
  5. Humphrey, S.J. et al. (2013) Cell Metab 17, 1009-20.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting IP: Immunoprecipitation

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
XP is a registered trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
All other trademarks are the property of their respective owners. Visit cellsignal.com/trademarks for more information.

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Revision 1
#14716

Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb

Western Blotting Image 1: Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from serum starved NIH/3T3 cells, untreated (-) or treated with insulin (150 nM, 5 min; +) or Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917 (100 ng/ml, 5 min; +) in the absence (-) or presence (+) of λ phosphatase, using Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb (upper) and β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (lower).
Western Blotting Image 2: Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb Expand Image
Western blot analysis of extracts from serum starved HeLa cells, untreated (-) or treated with Human Insulin-like Growth Factor I (hIGF-I) #8917 (100 ng/ml, 5 min; +) in the absence (-) or presence (+) of λ phosphatase, using Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb (upper) and Sin1 (D7G1A) Rabbit mAb #12860 (lower).
Immunoprecipitation Image 1: Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb Expand Image
Immunoprecipitation of phospho-Sin1 (Thr86) from serum starved NIH/3T3 cell extracts treated with insulin (150 nM, 5 min) using Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (lane 2) or Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb (lane 3). Lane 1 is 10% input. Western blot analysis was performed using Phospho-Sin1 (Thr86) (D4U9L) Rabbit mAb.