Revision 7
Cell Signaling Technology

Orders: 877-616-CELL (2355) [email protected]

Support: 877-678-TECH (8324)

Web: [email protected] cellsignal.com

3 Trask LaneDanversMassachusetts01923USA
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Applications:

WB, W-S, IF-IC, FC-FP

REACTIVITY:

H

SENSITIVITY:

Endogenous

MW (kDa):

70 Zap-70, 72 Syk

SOURCE:

Rabbit

UniProt ID:

#P43403, #P43405

Entrez-Gene Id:

7535, 6850

Product Information

Product Usage Information

Application Dilution
Western Blotting 1:1000
Simple Western™ 1:10 - 1:50
Immunofluorescence (Immunocytochemistry) 1:50
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) 1:50 - 1:200

Storage

Supplied in 10 mM sodium HEPES (pH 7.5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA and 50% glycerol. Store at –20°C. Do not aliquot the antibody.

Specificity / Sensitivity

Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody detects endogenous levels of Zap-70 only when phosphorylated at Tyr319. It cross-reacts with endogenous levels of Syk when phosphorylated at Tyr352.

Species Reactivity:

Human

Species predicted to react based on 100% sequence homology

Mouse, Rat, Hamster, Monkey, Chicken, Bovine, Dog, Pig, Horse

Source / Purification

Polyclonal antibodies are produced by immunizing animals with a synthetic phosphopeptide corresponding to residues surrounding Tyr319 of human Zap-70. Antibodies are purified by protein A and peptide affinity chromatography.

Background

The Syk family protein tyrosine kinase Zap-70 is expressed in T and NK cells and plays a critical role in mediating T cell activation in response to T cell receptor (TCR) engagement (1). Following TCR engagement, Zap-70 is rapidly phosphorylated on several tyrosine residues through autophosphorylation and transphosphorylation by the Src family tyrosine kinase Lck (2-6). Tyrosine phosphorylation correlates with increased Zap-70 kinase activity and downstream signaling events. Expression of Zap-70 is correlated with disease progression and survival in patients with chronic lymphocytic leukemia (7,8).
Phosphorylation of Tyr319 is required for the assembly of a Zap-70-containing signaling complex that leads to the activation of the PLC-gamma1-dependent and Ras-dependent signaling cascades in antigen-stimulated T cells (5,6). The orthologous Tyr352 residue in Syk is also involved in the association with PLC-gamma1 (9).

  1. Chu, D.H. et al. (1998) Immunol Rev 165, 167-80.
  2. Iwashima, M. et al. (1994) Science 263, 1136-9.
  3. Neumeister, E.N. et al. (1995) Mol Cell Biol 15, 3171-8.
  4. Chan, A.C. et al. (1995) EMBO J 14, 2499-508.
  5. Williams, B.L. et al. (1999) EMBO J 18, 1832-44.
  6. Di Bartolo, V. et al. (1999) J Biol Chem 274, 6285-94.
  7. Wiestner, A. et al. (2003) Blood 101, 4944-51.
  8. Crespo, M. et al. (2003) N Engl J Med 348, 1764-75.
  9. Law, C.L. et al. (1996) Mol Cell Biol 16, 1305-15.

Species Reactivity

Species reactivity is determined by testing in at least one approved application (e.g., western blot).

Western Blot Buffer

IMPORTANT: For western blots, incubate membrane with diluted primary antibody in 5% w/v BSA, 1X TBS, 0.1% Tween® 20 at 4°C with gentle shaking, overnight.

Applications Key

WB: Western Blotting W-S: Simple Western™ IF-IC: Immunofluorescence (Immunocytochemistry) FC-FP: Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized)

Cross-Reactivity Key

H: human M: mouse R: rat Hm: hamster Mk: monkey Vir: virus Mi: mink C: chicken Dm: D. melanogaster X: Xenopus Z: zebrafish B: bovine Dg: dog Pg: pig Sc: S. cerevisiae Ce: C. elegans Hr: horse GP: Guinea Pig Rab: rabbit All: all species expected

Trademarks and Patents

Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
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Revision 7
#2701

Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody

Western Blotting Image 1: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from Jurkat cells, starved for 16 hours, and treated with 2 mM H2O2 or with calf intestinal alkaline phosphatase (CIP), using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody (upper) or control Zap-70 Antibody #2702 (lower).
Western Blotting Image 2: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Western blot analysis of extracts from Ramos cells, untreated or treated with anti-IgM (12 µg/ ml for 2 minutes), hydrogen peroxide (10 mM for 2 minutes) or lambda phosphatase, using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/ Syk (Tyr352) Antibody.
Western Blotting Image 1: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Simple Western™ analysis of lysates (1.0 mg/mL) from Jurkat cells using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody #2701. The virtual lane view (left) shows the target band (as indicated) at 1:10 and 1:50 dilutions of primary antibody. The corresponding electropherogram view (right) plots chemiluminescence by molecular weight along the capillary at 1:10 (blue line) and 1:50 (green line) dilutions of primary antibody. This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 66-440 kDa separation module.
Immunofluorescence Image 1: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Immunofluorescent analysis of Jurkat cells, CD3-treated (left) or untreated (right), using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody (red). Blue pseudocolor = DRAQ5 (fluorescent DNA dye).
Flow Cytometry Image 1: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Two-color flow cytometric analysis of Jurkat cells, untreated (left) or anti-CD3 activated (right), using Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody and Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) (E10) mAb #9106. Anti-CD3 activation increases the intensity of label with both antibodies.
Flow Cytometry Image 2: Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody Expand Image
Flow cytometric analysis of Jurkat cells, untreated (blue) or CD3 treated (green), using Phospho-Zap70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) Antibody compared to a nonspecific negative control antibody (red).