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フローサイトメトリーによる免疫シグナル伝達と表現型解析のプロトコール適応表

こちらのプロトコール適応表から、同一のプロトコールが機能する表面抗原や細胞内抗原に対する抗体を特定できます。ページの下部の、コンテンツやプロトコール適応表の使い方の説明文をご覧ください。

抗体クローン情報とプロトコール適応試験

 
抗体クローン情報 プロトコール適応試験 入手可能な標識
(蛍光色素名の上に蛍光スペクトル (nm) が記載されています)
 
  Violet Laser Blue Laser Red Laser
  プロトコール 450 455 520 520 578 667 678 695 785 660 668 710 719 785
抗体
エピトープ
の位置
動物種
交差性
生細胞 固定、メタノール透過化 固定、Triton透過化 FoxP3の固定、透過化 violet Fluor™ 450 Pacific Blue™ FITC Alexa Fluor® 488 PE PE-Cy®5 PerCP PerCP-Cy®5.5 PE-Cy®7 APC Alexa Fluor® 647 red Fluor™ 710 Alexa Fluor® 700/th> APC-Cy®7
Aiolos (D1C1E) IC H, M 非推奨 推奨 推奨 非推奨       94568 21799           10896   59612  
Phospho-Akt
(Thr308) (D25E6)
IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       43506 13842           48646      
BCL6 (D4I2V) IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       26556 84882           41194      
Bcl-xL (54H6) IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 推奨 推奨       2767 13835       81965 12099 86387      
Cleaved Caspase-3
(Asp175) (D3E9)
IC H, M 非推奨 推奨 推奨 推奨   8788   9603 12768           9602      
CD3 (17A2) EC M 推奨 性能低下 推奨 推奨 38527   86603   28306         24265   26582   17857
CD3 (UCHT1) EC H 推奨 推奨 推奨 推奨 61347   86774   46233     31767 62670 19881   44330   72359
CD4 (RM4-5) EC M 推奨 推奨 推奨 推奨 92599   96127   26589     49482 38341 82116   75508   46328
CD4 (RPA-T4) EC H 推奨 推奨 推奨 推奨 26755   48705   55927     46699 66182 78292       94467
CD8α (2.43) EC M 推奨 性能低下 推奨 推奨 17083   35467   56984     72461 87922 64786        
CD8α (RPA-T8) EC H 推奨 非推奨 推奨 推奨 25109   55397   88829     75003 27442 64915   86135   26030
CD11b/ITGAM (M1/70) EC H, M 推奨 推奨 推奨 推奨 70078   24442   24965 16538   85601   41249   55274   81222
CD11c (3.9) EC H 性能低下 非推奨 非推奨 推奨 97473   69627   56025       80342 36268   42847   51562
CD14 (61D3) EC H 推奨 推奨 推奨 推奨 82944   29943   59896     99811 44947 36377   64342    
CD16 (3G8) EC H 推奨 非推奨 推奨 推奨         82004       23290          
CD19 (1D3) EC M 推奨 非推奨 非推奨 性能低下 54508   53343   82168     43145 27221 39831   72880    
CD19 (SJ25C1) EC H 推奨 非推奨 性能低下 推奨     49255   60751   47432   78813 31943        
CD19 (Intracellular Domain)
(D4V4B)
IC H, M 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       70418 58960           16344      
CD20 (2H7) EC H 推奨 非推奨 非推奨 推奨 88560   87491   26137     72374 50665 69077   38268   78944
CD24 (M1/69) EC M 推奨 非推奨 非推奨 性能低下 9705       90378         68390        
CD25/IL2-Rα (BC96) EC H 性能低下 非推奨 非推奨 非推奨                 43212 20164        
CD27 (O323) EC H 推奨 非推奨 非推奨 性能低下 70511   35379   55584       66120 42404       19805
CD28 (CD28.2) EC H 推奨 非推奨 非推奨 非推奨     15666   27826     25544 82076 73906        
CD38 (HIT2) EC H 推奨 非推奨 非推奨 非推奨 24713   90005   90775     10284   73977        
CD44 (IM7) EC H, M 推奨 推奨 推奨 推奨 53289   75122   88151 94170   38200 43675 80813   63882   86109
CD45 (30-F11) EC M 推奨 推奨 推奨 推奨 83090   62307   47742       60943 41104   99856    
CD45 (HI30) EC H 推奨 推奨 推奨 推奨 74292   86532   89492     32125 28418 98228   39170   77322
CD45RA (HI100) EC H 推奨 性能低下 性能低下 性能低下 72177   23672   96979     78564 37558 97321       37674
CD45R/B220
(RA3-6B2)
EC H, M 推奨 推奨 推奨 推奨 67084   34399   93992 16935   17299 82922 98126   82984   31953
CD56/NCAM1 (MY31) EC H 推奨 非推奨 非推奨 性能低下     67184   73521       42804 51997        
CD62L/L-Selectin
(MEL-14)
EC M 推奨 非推奨 非推奨 性能低下     76378   32908     90088 61885 46592   60310   18118
Phospho-CD79A
(Tyr182) (D1B9)
IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       52821 14948           29742      
CD68 (D4B9C) EC H 性能低下 推奨 推奨 推奨       24850 79594                  
CD86/B7-2 (GL-1) EC M 推奨 性能低下 性能低下 推奨     99879   60712       11527 84393        
CD161/NK1.1 (PK136) EC M 推奨 非推奨 推奨 推奨     28486   45378     88957 78652 35986   19809    
CD161/KLRB1
(HP-3G10)
EC H 性能低下 非推奨 非推奨 非推奨 26540   67086   83130     26217   51113        
Phospho-CREB
(Ser133) (87G3)
IC H, M, R 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       9187 14228           14001      
CTLA-4 (D4E9I) EC H 推奨 性能低下 性能低下 試験されていない       15162 15132                  
EOMES (D8D1R) IC H 非推奨 推奨 推奨 推奨         17984           42582      
FoxP3 (3G3) IC M 非推奨 非推奨 非推奨 推奨         65210       10680 41442        
F4/80 (BM8.1) EC M 推奨 性能低下 推奨 試験されていない 40781   52267   64763     88154 80380 86007   94009   19233
GATA-3 (D13C9) IC H, M 非推奨 推奨 推奨 試験されていない         13411                  
Granzyme B (D2H2F) IC H, M 非推奨 推奨 推奨 推奨       33359 65563           50590      
Helios (D8W4X) IC H, M 非推奨 推奨 試験されていない 非推奨       56424 29360           65432      
Phospho-Histone H2A.X
(Ser139) (20E3)
IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       9719 5763           9720      
Histone H3 (D1H2) IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 性能低下 試験されていない   12167     82241           12230      
Phospho-Histone H3
(Ser10) (D2C8)
IC H, M, R, Mk, Z 非推奨 推奨 推奨 性能低下   8552   3465 5764           3458      
Acetyl-Histone H3
(Lys9) (C5B11)
IC H, M, R, Mk, Z 非推奨 推奨 推奨 試験されていない   11857   9683 28036           4484      
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys27) (C36B11)
IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       5499 40724           12158      
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys36) (D5A7)
IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 非推奨 試験されていない         46287                  
Tri-Methyl-Histone H3
(Lys4) (C42D8)
IC H, M, R, Mk, Dm, Sc 非推奨 推奨 推奨 試験されていない                     12064      
HLA-DR (L243) EC H 推奨 推奨 推奨 非推奨     54126   78397   17634         46861   92482
Ikaros (D6N9Y) IC H, M 非推奨 推奨 推奨 非推奨       89389 33462           15740      
IκBα (L35A5) IC H, M, R, Mk, B, Pg 非推奨 推奨 推奨 試験されていない   13656   5743 7523                  
IL-2 (JES6-5H4) IC M 非推奨 性能低下 推奨 非推奨         87412         74445        
Phospho-IRF-3
(Ser396) (D6O1M)
IC H, M, R 非推奨 推奨 非推奨 試験されていない       53539 83611                  
MHC Class II (I-A/I-E)
(M5/114.15.2)
EC M 推奨 推奨 推奨 推奨 86628   42594   67762     16114   64776   29097   55413
Phospho-NF-kB p65
(Ser536) (93H1)
IC H, M, R, Hm, Mk, Pg 非推奨 推奨 推奨 非推奨       4886 5733           4887      
Nur77 (D63C5) IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない         59999                  
Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2)
(Thr202/Tyr204) (197G2)
IC H, M, R, Mk, Mi, Dm, Z, Pg 非推奨 推奨 推奨 試験されていない   14196   13214 14095       98168 33370 13148   15892  
Cleaved PARP (Asp214) (D64E10) IC H, Mk 非推奨 推奨 推奨 推奨       9148 8978           6987      
Phospho-PLCγ1
(Tyr783) (D6M9S)
IC H, M 非推奨 推奨 試験されていない 試験されていない       25678 14461           88717      
リン酸化S6 Ribosomal Protein
(Ser235/236) (D57.2.2E)
IC H, M, R, Mk, Mi, Sc 非推奨 推奨 推奨 試験されていない   8520   4803 5316       34411 14733 4851   27036  
Phospho-SLP-76
(Ser376) (D7S1K)
IC H 非推奨 推奨 非推奨 試験されていない   83768   90247 16318           40887      
Phospho-Stat1
(Tyr701) (58D6)
IC H, M 非推奨 推奨 非推奨 非推奨       9174 8062           8009      
Phospho-Stat2
(Tyr690) (D3P2P)
IC H, R 非推奨 推奨 非推奨 非推奨       68826 77366           90740      
Phospho-Stat3
(Tyr705) (D3A7)
IC H, M, R, Mk 非推奨 推奨 非推奨 非推奨       4323 8119           4324      
Phospho-Stat3
(Ser727) (D4X3C)
IC H 非推奨 推奨 非推奨 非推奨       58978 87544           71958      
Phospho-Stat4
(Tyr693) (D2E4)
IC H 非推奨 推奨 非推奨 非推奨         13223                  
Phospho-Stat5
(Tyr694) (C71E5)
IC H, M 非推奨 推奨 非推奨 非推奨       3939 5387           9365      
Phospho-Stat5
(Tyr694) (D47E7)
IC H, M 非推奨 推奨 非推奨 非推奨         14603                  
Phospho-Stat6
(Tyr641) (D8S9Y)
IC H, M 非推奨 推奨 非推奨 非推奨         99902           10205      
Phospho-STING
(Ser365) (D1C4T)
IC M 非推奨 推奨 推奨 試験されていない                            
Phospho-STING
(Ser366) (D8K6H)
IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       41622             43499      
Phospho-Syk
(Tyr525/526) (C87C1)
IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       4349 6485           12081      
Phospho-TBK1/NAK
(Ser172) (D52C2)
IC H, M 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       14586 13498           14590      
T-bet/TBX21 (D6N8B) IC H 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       14298             14307      
TCF1/TCF7 (C63D9) IC H, M 非推奨 推奨 推奨 推奨   9066   6444 14456           6709      
TNF-α (D2D4) IC M 非推奨 推奨 推奨 推奨       87509                    
Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk
(Tyr352) (65E4)
IC H, M 非推奨 推奨 試験されていない 試験されていない       73382 14791           82975      
Phospho-4E-BP1
(Thr37/46) (236B4)
IC H, M, R, Mk, Dm 非推奨 推奨 推奨 試験されていない       2846 7547           5123      

表の記述:   IC: 細胞内   EC:細胞外 推奨推奨 性能低下機能の低下がみられる 非推奨非推奨 試験されていない未試験

種交差性: H—ヒト M—マウス R—ラット Mk—サル B—ウシ Pg—ブタ Mi—ミンク Dm—キイロショウジョウバエ Z—ゼブラフィッシュ Sc—出芽酵母

プロトコールの概要

プロトコールNo. プロトコール情報 プロトコールの概説 利用可能な固定‐透過化キット
1 生細胞表面染色プロトコール 染色前に細胞の固定や透過化を行わないプロトコール 適用なし
2 固定した細胞の細胞内染色:メタノールによる透過化プロトコール 染色前にホルムアルデヒドとメタノールで細胞の固定と透過化を行う 13593
3 固定した細胞の細胞内染色:Triton™ X-100透過化プロトコール 染色前にホルムアルデヒドとTriton™ X-100で細胞の固定と透過化を行う 51995
4 固定した細胞の細胞内染色:FoxP3/転写因子プロトコール 転写因子や核タンパク質に対する抗体に最適化された、固定と透過化バッファーセットを用いる 43481

フローサイトメトリー:多色パネルを確立するための抗体とプロトコール選択ガイド

フローサイトメトリー実験で生細胞や固定した細胞を染色する場合には、様々なプロトコールから適切なものを選択する必要があります。エプトープの認識に悪影響を与えることなく、標的タンパク質が存在する細胞成分に抗体がアクセスできるように、細胞の染色に用いる抗体に適応するプロトコールを選択しなければなりません

例えば、リン酸化フローサイトメトリーで細胞内の標的を染色する場合は、染色前に細胞の固定と透過化を行う必要があります。しかし、固定 (fix) や透過化 (perm) プロトコールは、エピトープと抗体の相互作用を変化させる可能性があります。特に透過化試薬の選択は、アッセイに用いる抗体の感度や特異性、機能に大きな影響を与えます。これには抗原と抗体クローンの両方が影響します。

透過化には、メタノールなどの有機溶媒や、Triton™ X-100やサポニンなどの界面活性剤を用いるのが一般的です。この中でサポニンが最も透過化力が低く、コレステロールに結合して細胞膜に孔を形成しますが、核膜やミトコンドリア膜などの細胞内膜は透過化しません。Triton™ X-100とメタノールは、ほとんどの細胞内膜を十分に透過化することができ、メタノールが最も強力に透過化をします。しかし、メタノールはエピトープを破壊することがあり、表面マーカーに対する抗体の一部など、メタノールによる透過化の後は機能しなくなるものもあります。

プロトコール適応表から、同一のプロトコールが機能する表面抗原や細胞内抗原に対する抗体を特定できます

Cell Signaling Technology® (CST) は、様々な蛍光色素で標識したフローサイトメトリー検証済み抗体の多様なカタログを提供しています。こちらの、フローサイトメトリーによる免疫シグナル伝達と表現型解析のプロトコール適応表は、CSTカタログに掲載されている抗体が、どの染色プロトコールに適応するかを簡単に確認できるようにしたものです。特にフローサイトメトリーによるシグナル伝達解析で多重染色パネルで同時に使用する複数の抗体を選択する場合に便利です。この表からは特に以下のようなものが確認できます。

  • 生細胞プロトコールのみに適応する、表面マーカー (CDマーカー) 抗体
  • 通常はフローサイトメトリーで細胞内抗原を染色する場合に用いる、固定-透過化プロトコールで機能するCDマーカー
  • 固定と透過化 (fix-perm) に適応する抗体で使用する、固定、透過化プロトコール
  • Fix-permプロトコールのみで機能する抗体、また、これらの抗体で使用するプロトコール

プロトコール適応表の使い方

抗体クローン情報には、CST抗体のクローン、エピトープの位置、実験で使用し得る生物種交差性の情報が記載されています。

プロトコール適応試験には、それぞれの抗体クローンで試験した一般的なプロトコールが記載されており、パネルを構築する場合の時間の短縮に役立てることができます。多重染色 (マルチプレックス) 実験で使用する抗体を選択する場合は、それぞれのクローンが同一のプロトコールに適応することを確認してください。緑色のマークは、そのプロトコールが推奨されていることを示します。黄色のマークは、そのプロトコールの試験を行ったところ機能が低下している可能が示され、さらにプロトコールを最適化することが推奨されることを示します。赤色のマークは、そのプロトコールが推奨されていないことを示し、白色のマークは、そのプロトコールが未試験であることを示します。

入手可能な標識には、それぞれのクローンについてCSTから入手可能な直接標識抗体製品が記載されており、それぞれの蛍光色素のおおよその最大蛍光波長を基に、左から右に整理されています。製品番号のリンクをクリックすると、興味のある標識抗体の専用製品ページが表示されます。

For Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.
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