フローサイトメトリー用抗体の検証
CSTのフローサイトメトリー検証済み製品は、生物学的に適切なモデルを用いて厳格な試験を実施しています。この試験で、標識抗体、非標識抗体ともに、特異性の確認と、最適なシグナル・ノイズ比 (S/N) の検証を行なっています。異なる用途の検証も行うことによって、抗体の特異性をさらに確認します。また、最適希釈率、特異性、安定性、ロットごとの再現性の検証を全ての抗体で実施しており、これらを用いて常に安定した結果が得られることを確認しています。
徹底的に検証されたCSTのフローサイトメトリー用抗体は、細胞株、組織懸濁液、穿刺液、または血液試料における複雑な細胞内シグナル伝達カスケードの解析に用いることが可能で、お客様の実験結果をさらに高精度で信頼度の高いものにします。
検証には次のようなものが含まれます。
- ポジティブおよびネガティブ細胞株を用いた比較検証
- アイソタイプコントロールとの比較による、一次抗体の非特異的結合の検証
- パスウェイ特異的阻害剤/活性化剤の処理による比較検証
- ブロッキングペプチド、siRNA、発現ベクターを用いた特異性の検証
- フォスファターゼ処理によるリン酸化特異性の検証
- 時間経過に伴う安定性を保証し、ロット間のばらつきをなくすための、広範囲にわたる品質管理試験
- 希釈条件やプロトコールの最適化
- 複数のアプリケーションに渡る抗体の特異性検証
CST抗体のパフォーマンスは、日常的に複数プラットフォームに渡って検証されています。下記は、このようなテストが必要な理由を示す一例です。
フローサイトメトリーと免疫蛍光染色における比較解析。これにより、CST抗体の高い特異性が確認できます。シグナル強度はそれほど強くないものの、細胞の核コンパートメントが正しく染色されています。
A.
B.
他社製品Phospho-Stat5 (Tyr694) 抗体を用いたフローサイトメトリー解析で、Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb #4322のものより強いシグナルが検出されました (A)。しかしながら、免疫蛍光染色による解析で、他社製品では細胞質と細胞膜に不適切な染色がみられます。一方で、#4322では核のみの適切な染色がみられました (B)。