重要：製品がLeica® BOND™で検証され、使用が推奨されているかどうかについては、データシート上部にあるApplicationsの項目、あるいはウェブサイトの製品ページで確認してください。その場合、手順については製品別のプロトコールを参照してください。検証済みのLeica® BOND™プロトコールを使用しない製品の場合、出発点として以下の条件が役立ちます。
| 手順 | 試薬 | 時間/温度 | |
|---|---|---|---|
| 1 | ワックスの除去 | BOND™ Dewax Solution、100% Alcohol、BOND™ Wash Solution | Leica® BOND™プログラム前 |
| 2 | 抗原賦活化 | BOND™ Epitope Retrieval ER2 Solution | 20分、100˚C | プロトコール：ER2でHIER 20分 |
| 3 | ペルオキシドのブロッキング | Refine Detection Kit Peroxide Block* | 5 分 |
| 洗浄 | BOND™ Wash Solution | 3x分 | |
| 4 | タンパク質ブロッキング (オプション) | NGS #5425またはAnimal-Free Blocking Solution #15019 | 20 分 |
| 5 | 一次抗体 | SignalStain® Antibody Diluent #8112で希釈 | 30 分 |
| 洗浄 | BOND™ Wash Solution | 3x 2:00 分 | |
| NA | Post Primary Mouse Linker | Refine Detection Kit Post Primary* | ラビット抗体では適用なし、マウス抗体では10分 |
| 6 | 二次検出 | Refine Detection Kit Polymer* | 10 分 |
| 洗浄 | BOND™ Wash Solution/Deionized Water | カスタム (下記参照) | |
| 7a | 可視化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | X 分 |
| 7b | 可視化 | Refine Detection Kit Mixed DAB Refine* | 10 分 |
| 洗浄 | Deionized Water | 3x分 | |
| 8 | 対比染色 | Refine Detection Kit Hematoxylin* | 5 分 |
| 洗浄 | Deionized Water | X 分 | |
| 洗浄 | BOND™ Wash Solution | X 分 | |
| 洗浄 | Deionized Water | X 分 | |
| 9 | 脱水 (発色後処理) | ||
| 95%エタノールで切片を各10秒間ずつ、2回インキュベートしてください。 | |||
| 100%エタノールで切片を各10秒間ずつ、2回インキュベートしてください。 | |||
| キシレンで切片を各10秒間ずつ、2回インキュベートしてください。 | |||
| 10 | 切片をSignalStain® Mounting Medium #14177とカバースリップで封入してください。 | ||
| (オプション) カスタム洗浄： | BOND™ Wash Solution | 2:00分 | |
| BOND™ Wash Solution | ディスペンサータイプ：オープン 0:00分 | ||
| BOND™ Wash Solution | 2:00分 | ||
| BOND™ Wash Solution | ディスペンサータイプ：オープン 0:00分 | ||
| BOND™ Wash Solution | 0:00 | ||
| Deionized Water | 0:00 | ||
*試薬は BOND™ Polymer Refine Detection キット (カタログ番号：DS9800) に含まれています。
LEICA® is a registered trademark of Leica Microsystems IR GmbH.
BOND™ is a trademark of Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd.の商標です。No affiliation or sponsorship between CST and Leica Microsystems IR GmbH or Leica Biosystems Melbourne Pty. Ltd is implied.
更新：2019年7月
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.