SimpleChIP® Plus Sonication Chromatin IP Kit #56383
- ChIP
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Product Description
Cells or tissue are fixed with formaldehyde and lysed, and chromatin is fragmented by sonication to obtain chromatin fragments ranging from 200 to 1000 bp. Sonication-based fragmentation is the more traditional method for fragmenting chromatin; however, sonication should be optimized such that the desired fragment size is achieved with the minimal amount of sonication required, as over-sonication can result in a decrease in immunoprecipitation, specifically for transcription factors and cofactors. The cell and nuclear lysis buffers for this kit have been optimized to maximize enrichment of histones, transcription factors and cofactors. Chromatin immunoprecipitations are performed using ChIP-validated antibodies and ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads. After reversal of protein-DNA cross-links, the DNA is purified using DNA purification spin columns, allowing for easy and efficient recovery of DNA and removal of protein contaminants without the need for phenol/chloroform extractions and ethanol precipitations. The enrichment of particular DNA sequences during immunoprecipitation can be analyzed by a variety of methods, including standard PCR, quantitative real-time PCR, or amplification for ChIP on chip, sequencing or cloning techniques.
The SimpleChIP® Plus Kit also provides important controls to ensure a successful ChIP experiment. The #56383 sonication ChIP kit contains a positive control Histone H3 Antibody, a negative control Normal Rabbit IgG Antibody, and primer sets for PCR detection of the human and mouse ribosomal protein L30 (RPL30) genes. Histone H3 is a core component of chromatin and is bound to most DNA sequences throughout the genome, including the RPL30 locus. Thus, the Histone H3 Antibody provides a universal positive control that should enrich for almost any locus examined.
Specificity / Sensitivity
Background
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