SimpleChIP® - ChIPアッセイキット

ソニケーション法または酵素法：CSTは、どちらの方法もサポートするキットをご用意しています

ソニケーション処理は、ChIPのクロマチン調製によく用いられる方法です。しかしながら、ほとんどのプロトコールでは、クロマチンを過酷な変性条件 (高熱、界面活性剤、せん断など) にさらす必要があり、抗体エピトープとクロマチンの完全性が損なわれてしまう恐れがあります。

CSTは、従来のソニケーション処理プロトコールの問題を避けるために、複数のオプションを提供します：

• ​ソニケーション法：CSTのソニケーションプロトコールは、特別に調製された細胞と核の溶解バッファーを用いています。この方法は、クロマチンの完全性と抗体エピトープを保護することによりChIP効率を向上させ、変化しやすくDNAとの相互作用が不安定な転写因子や転写コファクターでも使用できるようになりました。
• 酵素法​：酵素処理は、ソニケーション処理とは別のもう一つのクロマチン断片化手法であり、多様な標的のChIPに対応し、転写因子および転写コファクターの免疫沈降にも非常に適しています。この方法は、ヌクレオソームの間のリンカー領域の切断にMicrococcal Nucleaseを用います。クロマチンおよび抗体エピトープをコントロールして断片化や変性から保護することが容易であるために、ChIPを初めて行う方にとって理想的なオプションです。

ソニケーション法または酵素法を採用したCSTのSimpleChIPキットは、ヒストンの解析では従来のソニケーション法と同様の性能を示しますが、転写因子またはコファクターの解析では両方の方法で従来のソニケーション法より性能が優れています。

クロマチンをクロスリンクし、その後にMicrococcal Nuclease (CSTの酵素消化法：青)、CSTが提供するソニケーションバッファー (赤)、または従来のソニケーションバッファーを用いて (緑) で断片化し、記載の抗体を用いて免疫沈降しました。SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005のプロトコールに従い、シーケンシング用のDNAを調製しました。