SignalStar^™− 空間生物学用に検証された抗体

SignalStar Multiplex IHC技術は、特異的な一次抗体と蛍光検出試薬を用いて、FFPE組織サンプル中の複数の細胞内タンパク質を同時標識します。この技術により、組織サンプル中に発現するタンパク質の可視化と解析を行う空間生物学研究において、正確性と信頼性の高い結果が得られます。

CSTは、すべての抗体をアプリケーションごとに個別に検証しており、SignalStar mIHC抗体は、SignalStar技術での使用を目的とした検証が行われています。つまり、SignalStar抗体は、お客様のアッセイで毎回期待通りに機能することが保証されています。

抗体検証のプロセス

• SignalStarに用いる抗体はすべて、SignalStarの検証を行う前に、厳密なIHC-P用の検証プロセスに合格する必要があります。
• 連続切片を用いた従来のDAB発色染色の結果と直接比較して、SignalStar技術で得られた結果の特異性を確認します。
• 様々なマルチプレックスパネルを用いてあらゆる蛍光チャンネルとイメージングラウンドの組み合わせを設定し、SignalStarオリゴ標識抗体の検証および最適化を行います。
• 染色の再現性の確認だけでなく、異なる蛍光イメージ装置や日数を用いた実験、自動および手動プロトコールの比較によるSignalStarアッセイの検証を行います。
• SignalStarオリゴ標識抗体を用いた発色染色を利用して、抗原特異性が標識のプロセスを通して維持されることを確認します。
• 目的のバイオマーカーが発現していることが既知のポジティブコントロール組織で抗体を試験します。
• バイオマーカーの細胞内局在と共局在性を調査します。
• 関連するがんモデルで、SignalStarオリゴ標識抗体の性能を評価します。ヒトがん組織アレイを用いて、広範な組織タイプにおける抗体の性能を検証します。
• 各ロットを徹底的に試験し、空間生物学用に検証されたCST^®抗体を用いて正確なSignalStarの結果を得るために必要な再現性を確保します。希釈率とプロトコールは、あらかじめ決定および指定しています。

発色染色との比較

パラフィン包埋ヒト大腸腺がん組織を、Pan-Keratin (C11) & CO-0003-488 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #63566 (緑)、PD-L1 (E1L3N^®) & CO-0005-594 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #28249 (黄)、CD20 (E7B7T) & CO-0011-647 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #36775 (赤)、CD8α (D8A8Y) & CO-0004-750 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #62750 (シアン) を用いてSignalStarマルチプレックス免疫組織化学染色して解析しました。各マーカーの個別の染色像および結合した4プレックスの染色像を示しています。すべての蛍光色素に対し、記載した疑似カラーを割り当てています。染色は、Leica Biosystems社のBOND RX自動染色装置で行いました。連続切片を用いたSignalStarアッセイ (n=2) を行い、同等の領域における陽性細胞率を定量して発色法と比較しました。

標識の最適化

A) パラフィン包埋ヒト扁平上皮肺がん組織を、 488 (緑)、594 (黄)、647 (赤) & 750 (シアン) の各蛍光チャネルに配置したSIRPα (D6I3M) (SignalStar Conjugate 0034) を用いてSignalStar免疫組織化学染色して解析しました。代表的なROIにおける陽性細胞率を算出しています。B) パラフィン包埋ヒト乳管がん組織の連続切片を、Vimentin (D21H3) CO-0012-750 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #61002 (上段、シアン) またはHER2/ErbB2 (D8F12) & CO-0019-488 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #98860 (下段、緑) を用いてSignalStar免疫組織化学染色して解析し、1回目のイメージングラウンド (左) と2回目のイメージングラウンド (右) を比較しました。すべての蛍光色素に対し、記載した疑似カラーを割り当てています。染色は、Leica Biosystems社のBOND RX自動染色装置で行いました。

プロトコールの検証

パラフィン包埋ヒト結腸直腸がん組織の連続切片を、Granzyme B (D6E9W) & CO-0009-647 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #37369 (マゼンタ) または Pan-Keratin (C11) & CO-0003-647 SignalStar™ Oligo-Antibody Pair #16373 (赤) を用いてSignalStarマルチプレックス免疫組織化学染色して解析し、手動プロトコール (左) とBond RXプロトコール (右) の結果を比較しました。すべての蛍光色素に対し、記載した疑似カラーを割り当てています。

テクニカルサポート

SignalStarに関するトラブルシューティング情報や技術的な質問に対する回答は、テクニカルサポートページをご覧ください。

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U.S. Patent No. 10,781,477, foreign equivalents, and child patents deriving therefrom.